实验六小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 一、目的 1.学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。 3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、原理 种子中贮藏的碳水化合物主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 O-------nC12 11麦芽糖有还原性，能使 3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的 3-氨基 5-硝基水扬酸。后者可用分光光度 计法测定。 休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。 本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。 三、器材 1．25ml 刻度试管；2．吸管；3．乳钵；4．离心管；5.分光光度计；6．离心机；7．恒温水浴 四、试剂和材料 1.小麦种子 600 2.0.1％标准麦芽糖溶液20ml 精确称量100mg 麦芽糖，用少量水溶解后，移入100ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。 3.pH 6.9，0.02 摩尔／L 磷酸缓冲液 100ml 0.2mol/L 磷酸二氢钾67.5ml 与0.2mol/L 磷酸氢二钾82.5ml 混合，稀释10 4.l％淀粉溶液100 毫升 1g 可溶性淀粉溶于100 毫升 0.02 摩尔／L 磷酸缓冲液中，其中含有 0.0067 摩尔／L 氯化钠。

5.l％3,5-二硝基水杨酸试剂 200ml 1g 3,5-二硝基水杨酸溶于20 毫升2 摩尔／L 的氢氧化钠溶液和50 毫升水中；再加人30 克酒石酸 毫升。若溶液混浊，可过滤。6.l％氯化钠溶液 300 毫升 五、操作步骤1.种子发芽： 小麦种子浸泡2.5h 后，放人25恒温箱内或在室温下发芽。 2.酶液提取： 取发芽第三天或第四天的幼苗15 株，放人乳钵内氯化钠提纯数据分析，加海砂 200 毫克，加 1％氯化钠溶液10 毫升， 用力磨碎。在室温下放置 20 分钟，搅拌几次。将提取液离心（5000r／min）5 分钟。将上清液倒人量 筒，测定酶提取液的总体积。进行酶活力测定时，将酶提取液稀释10 取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15 粒作为对照（提取步骤同上）。 3.酶活力测定： （1）取25 毫升刻度试管4 支。编号。按下表要求加人各试剂（各试剂须25预热10 分钟）。 将各管混匀，放在25氯化钠提纯数据分析，水浴中保温3min 后，立即向各管中加人10％3,5-二硝基水杨酸溶液2 毫升。 （2）取出各试管，放人沸水浴中加热5min。冷至室温，加水稀释至25ml。将各管充分混匀。 （3）用空白管作对照；在500nm处测定各管的光吸收值，将读数填人上表。

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